Ny Clustering Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) dia teknika fanitsiana genome taranaka fahatelo izay nanova tanteraka izao tontolo izao tamin'ny vokatra avo lenta. Nampiasaina hitsaboana aretina sy aretina biolojika isan-karazany izy io. Ny bakteria isan-karazany sy ny prokaryotes hafa (toy ny archaea) dia manana rafitra CRISPR/Cas9 ihany koa mba hiarovana amin'ny phages. Voalaza fa ny paikady mifototra amin'ny CRISPR/Cas9 dia afaka manakana ny fitomboana sy ny fivoaran'ny homamiadan'ny nono triple negative (TNBC) amin'ny alàlan'ny fikendrena ireo fototarazo fanoherana mety ho niova, ny transcription, ary ny fitsipika epigenetic. Ireo fitsaboana ireo dia mety hanampy amin'ny famahana olana sarotra toy ny fanoherana ny fanafody hita na dia ao amin'ny TNBC aza. Amin'izao fotoana izao, fomba isan-karazany no ampiasaina hanaterana ny CRISPR/Cas9 amin'ny sela kendrena, toy ny ara-batana (microinjection, electroporation ary hydrodynamic modes), viral (adeno-associated virus sy lentivirus) ary tsy viral (liposomes sy lipid nanoparticles). )-particles). Na dia efa nisy aza ireo maodely isan-karazany novolavolaina handinihana ireo antony molekiolan'ny TNBC, ny tsy fahampian'ny fomba saro-pady sy voafaritra tsara amin'ny fanaterana fitaovana fanitsiana genome in vivo dia mametra ny fampiharana azy ireo amin'ny fitsaboana. Raha fintinina, ity famerenana ity dia mandinika amin'ny antsipiriany ny fandrosoana, ny fanamby, ny fetrany ary ny vinavinan'ny fitsaboana CRISPR/Cas9 ho an'ny TNBC mifototra amin'ny porofo efa misy. Asongadino ihany koa ny fomba ahafahan'ny fampifangaroana ny faharanitan-tsaina artifisialy sy ny fianarana milina manatsara ny paikady CRISPR/Cas9 amin'ny fitsaboana ny TNBC.
Ny homamiadana dia miavaka amin'ny fizarazarana sela tsy voafehy, ny fikorontanan'ny teboka fanaraha-maso ny tsingerin'ny sela, ary ny fiovan'ny fototarazo mpanafoana ny fivontosana (TSG) (Matthews et al., 2022). Amin'ireo karazana homamiadana samihafa, ny homamiadan'ny nono no karazana homamiadana mahazatra indrindra amin'ny vehivavy ary manana tahan'ny fahafatesana avo lenta manerantany (Waks sy Winer, 2019). Ny homamiadan'ny nono dia aretina tsy mitovy karazana miaraka amin'ny toetra samihafa, toy ny endri-javatra histolojika sy biolojika, ny fisehoana ara-pitsaboana sy ny fitondran-tena, ary ny valin'ny fitsaboana (Weigelt et al., 2010). Ny fanasokajiana ny homamiadan'ny nono dia manome fahatakarana mazava momba ny diagnostika homamiadan'ny nono sy ny vinavinan'ny fivontosana. Ny fampiasana biomarkers mahazatra sy ny endri-javatra klinikaopatologika no fepetra lehibe indrindra amin'ny fanasokajiana ny homamiadan'ny nono (Tsang sy Tse, 2019). Ny vinavina sy ny valin'ny fitsaboana ny homamiadan'ny nono dia voataonan'ny anton-javatra maro, anisan'izany ny fisian'ny estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2/neu), ary ny ambaratonga histolojika, ny karazana fivontosana, ary ny ambaratonga. ny habeny ary ny metastasis amin'ny lymph node (Al-Tubaiti, 2020). Dimy karazana molekiola anatiny amin'ny homamiadan'ny nono no voafaritra, anisan'izany ny luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like, ary claudin-low (Prat et al., 2015). Ny TNBC dia karazana molekiolarin'ny homamiadana izay tsy maneho ny ER, PR, ary HER2 rehetra (Yin et al., 2020). Ireo endri-javatra pathological ireo dia mifandray amin'ny TNBC, manamafy ny fivoarany haingana sy ny toetrany mahery vaika kokoa noho ny karazana homamiadan'ny nono hafa rehetra (Feng et al., 2018). Fanampin'izany, Peru et al (2000) dia nampiasa teknolojia microarray mba hanasokajiana indray ny homamiadan'ny nono sy hamantarana karazana dimy anatiny amin'ny homamiadan'ny nono (Cadenas, 2012). Ny homamiadan'ny nono basal-like dia karazana homamiadan'ny nono izay manana phenotype triple-negative ary mifandray amin'ny fivoarana haingana. Tsara homarihina fa ny homamiadan'ny nono basal-like rehetra dia matetika diso voamarina ho TNBC, fa 77% ihany no TNBC; Mifanohitra amin'izany kosa, 71–91% amin'ny TNBC no mitovy amin'ny fototra, izay midika fa mifanindry ireo karazana homamiadan'ny nono roa ireo ary maneho fanasokajiana samihafa (Wang D.-Y. et al., 2019). Izany dia miteraka filàna hamantarana ny tsy fitoviana amin'ny TNBC mba hanazavana ny vinavina sy hamantarana ny mety ho valin'ny fitsaboana ankehitriny sy amin'ny ho avy. Fanampin'izany, ny TNBC dia mitentina 15–20% amin'ny tranga homamiadan'ny nono rehetra ary mahazatra kokoa amin'ny vehivavy latsaky ny 50 taona. Voalaza fa misy fiovan'ny BRCA1 na BRCA2 eo amin'ny 20% eo ho eo amin'ny tranga TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017). , 2020). Ny fanadihadiana ihany koa dia naneho fa ny TNBC dia manana tontolo iainana miavaka izay ahitana ambaratonga avo lenta amin'ny vascular endothelial growth factors, tumor-associated macrophages (TAMs), tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), ary molekiola hafa tafiditra amin'ny fitomboan'ny sy ny fifindran'ny fivontosana. Noho izany, ny fahatakarana ny tontolo manodidina ny TNBC dia tena ilaina amin'ny vinavina sy ny fitsaboana azy (Fan sy He, 2022).
Mba hanombanana ny vinavinan'ny TNBC sy hahazoana antoka ny fitsaboana mahomby, dia zava-dehibe ny famaritana marina, izay mifototra indrindra amin'ny immunohistochemistry (IHC) mba hamantarana ny ER, PR ary HER2, ary ny mammography mba hamantarana ny neoplasms amin'ny nono. Na izany aza, ny mammography dia tsy afaka maneho tsara ny endri-javatra intratumoral toy ny nekrosis sy fibrosis (Deepak Singh et al., 2021). Koa satria ny vinavina ratsy sy ny famaritana dia manakana ny dokotera tsy hanome fanafody mety (Chaudhary, 2020), dia misy paikady isan-karazany ampiasaina hanatsarana ny fikarakarana ny marary voan'ny TNBC. Amin'izao fotoana izao, fanafody roa, doxorubicin sy cyclophosphamide, no ampiasaina amin'ny marary voan'ny TNBC ary naneho vokatra tsara. Ankoatra izany, dia ampiasaina ny fanafody platinum hafa, toy ny carboplatin sy cisplatin (Sikov et al., 2015). Ankoatra izany, ny PARP inhibitors toy ny Olaparib, Velaparib, ary PF-01367338 dia nampiasaina ho fanafody chimiothérapie mety hitsaboana ny TNBC (Ishino et al., 2018). Koa satria voalaza fa tafiditra amin'ny fisian'ny sy ny fivoaran'ny TNBC ny lalan'ny famantarana Wnt/b-Catenin, NOTCH, ary Hedgehog, dia mety ho paikady manan-danja ny fikendrena fanafody amin'ireo lalan'ny sela ireo (Aysola et al., 2013). Na dia mbola ny fandidiana, ny fitsaboana amin'ny taratra ary ny chimiothérapie aza no fototry ny fitsaboana ny TNBC ankehitriny, dia nisy fandrosoana lehibe natao tamin'ny famolavolana fitsaboana vaovao anisan'izany ny fitsaboana mikendry manokana, ny fitsaboana amin'ny alalan'ny hery fiarovana, ireo fitaovana fanitsiana fototarazo mifandraika amin'ny CRISPR isan-karazany toy ny Cas9n, dCas9., CRISPR/Cas12, fanitsiana voalohany, ary ny fitsaboana fototarazo mikendry CRISPR/Cas9. Eto isika dia hifantoka amin'ireo fitaovana fanitsiana fototarazo mifandraika amin'ny CRISPR isan-karazany ampiasaina amin'ny fitsaboana ny TNBC. Anisan'izany ny CRISPR/Cas9 izay nahazoana fiheverana betsaka.
Ny Cas9n, fantatra ihany koa amin'ny hoe Cas9 nickase, dia karazana proteinina Cas9 novokarina ara-jenetika avy amin'ny rafitra fanitsiana ny genome CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019). Amin'ny endriny tany am-boalohany, ny proteinina Cas9 dia misy sehatra nuclease roa: RuvC sy HNH, izay ny asany lehibe indrindra dia ny fanapahana ny kofehy ADN roa. Na izany aza, ao amin'ny Cas9n, ny iray amin'ireo sehatra nuclease, HNH, dia miova ara-jenetika ary lasa tsy miasa. Noho izany, ny sehatra HNH an'ny Cas9n dia mijanona ho tsy miasa. Ny sehatra RuvC ihany no mijanona ho mavitrika, ahafahan'ny Cas9n manapaka na mamorona fiatoana amin'ny kofehy ADN tokana (Trevino sy Zhang, 2014). Raha ampitahaina amin'ny Cas9, ny Cas9n dia afaka mampihena tsara ny fiantraikany ivelan'ny tanjona ary manatsara marina ny mekanisma fanamboarana sela. Azo ampiasaina hamahana olana isan-karazany ny Cas9n, toy ny famoronana fiatoana amin'ny toerana manokana ao amin'ny ADN roa sosona. Ho an'ity tanjona ity, dia nisy molekiola Cas9n roa natambatra ary nampiasaina niaraka (Yee, 2016). Ny Mixed lineage kinase 3 (MLK3) dia protein kinase miasa amin'ny mitogen izay miasa ho toy ny mpandrindra fototra mandritra ny metastasis TNBC (Cronan et al., 2012).
Afaka manetsika lalan'ny famantarana maro ny MLK3 izay mitarika amin'ny metastasis TNBC. Ohatra, ny lalan'ny c-Jun N-terminal kinase (JNK) dia mandrindra ny fivezivezen'ny sela sy ny fahasimban'ny matrix extracellular, ary ny MLK3 dia manetsika ny lalan'ny JNK, ka mampitombo ny fivezivezen'ny sela ary manome toetra manafika (Rattanasinchai sy Gallo, 2016). Ny MLK3 koa dia mandrindra ny EMT. Mba hanaovana izany, dia manetsika ireo singa transcription any ambany toy ny Snail, Slug ary Twist. Ireo singa ireo dia manakana ny fanehoana ireo marika epithelial ary mampiroborobo ny fanehoana ireo marika mesenchymal, izay mitarika amin'ny fahazoana phenotype metastatic (Casalino et al., 2023). Hita fa mitana anjara toerana amin'ny fanavaozana ny ECM sy ny fampahavitrihana ireo proteases toy ny matrix metalloproteinases (MMPs) izay manimba ny ECM ny MLK3. Izany dia manamora ny fidiran'ny sela fivontosana sy ny fiparitahana any amin'ny toerana lavitra (Katari et al., 2019). Noho izany, ny fanadihadiana teo aloha dia naneho fa mitana anjara toerana lehibe amin'ny TNBC ny MLK3. Nampiasa modely TNBC i Rattanasinchai sy Gallo mba handinihana ny anjara asan'ny MLK3 ary nahita fa mampiroborobo ny fivoaran'ny homamiadana amin'ny alàlan'ny lalan'ny famantarana manokana izany. Nampiasa CRISPR/Cas9n izy ireo mba hanovana ny MLK3 ary nahita fihenana be dia be tamin'ny metastasis TNBC (Rattanasinchai sy Gallo, 2016).
Ny dCas9, izay matetika antsoina hoe Cas9 tsy mavitrika, dia endrika novaina avy amin'ny proteinina Cas9. Tsy tahaka ny Cas9 mavitrika, ny dCas9 dia tsy manana hetsika endonuclease, ka mahatonga azy tsy afaka miteraka fahatapahan'ny ADN roa sosona. Noho izany, ny dCas9 dia azo ampiasaina hikendry tsara ireo faritra manokana ao amin'ny genome tsy misy fanovana na fanovana ny filaharan'ny ADN (Wang et al., 2016). Ao amin'ny dCas9, ny proteinina endonuclease roa, RuvC sy HNH, dia tsy miasa intsony amin'ny alàlan'ny fanakanana ireo asidra amine manan-danja. (Richter et al., 2016). Na dia tsy manana hetsika fanapahana ADN aza ny dCas9, dia mitana anjara toerana manan-danja maromaro amin'ny fikarohana momba ny fototarazo sy ny bioteknolojia. Ohatra, mamela ny fijerena ireo faritra manokana ao amin'ny genome izy io, manamora ny fanaraha-maso ny fandikana, ary mampiroborobo ny fanovana epigenetika (Brocken et al., 2018).
Ny singa fandikana ZEB1 (zinc finger E-box binding homeobox 1) dia mitana anjara toerana manokana sy manan-danja amin'ny fanelanelanana ny fifindran'ny epithelial-mesenchymal (EMT), dingana sela izay mitranga mandritra ny fivoaran'ny embryon, ny fanamboarana ny sela, ary ny fivoaran'ny homamiadana. Tafiditra amin'izany ny fiovan'ny sela epithelial ho sela mesenchymal, izay miteraka fiovana eo amin'ny endriky ny sela, ny fivezivezena, ny fanafihana, sns. (Wu et al., 2020). Ny ZEB1 dia manakana ny marika epithelial maromaro, toy ny E-cadherin sy Occludin, izay tompon'andraikitra amin'ny fitazonana ny fifamatoran'ny sela sy ny polarity amin'ny sela epithelial ao amin'ny TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008). Ho fanampin'izany, ny ZEB1 dia mampihetsika marika sasany toy ny N-cadherin, vimentin ary fibronectin (Konradi et al., 2014) ary mandrindra ihany koa ny fototarazo tafiditra amin'ny fanavaozana ny cytoskeletal toy ny Rho GTPases sy matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). et al., 2014). 2022), ankoatra izany, dia misy fiantraikany amin'ny lalan'ny famantarana isan-karazany ihany koa izany toy ny transforming growth factor-β (TGF-β), ny famantarana Wnt, sns., ka mampiroborobo ny fidiran'ny fivontosana sy ny metastasis ao amin'ny TNBC (Chen et al., 2016). Maro ireo fanadihadiana sy porofo ara-tsiansa no manondro fa ny ZEB1 dia manana fahafahana lehibe ho toy ny fitaovana sarobidy amin'ny fitadiavana sy fitsaboana ny TNBC. Tao anatin'ny fanadihadiana vao haingana, Waryah et al. dia nampiasa modely TNBC ary nahavita nanakana tanteraka ny ZEB1 tamin'ny alalan'ny dCas9. Noho izany, dia nahita specificity avo lenta sy fanakanana saika tanteraka ny ZEB1 izy ireo tamin'ny toe-javatra in vivo (Waryah et al., 2023).
Fitaovana fanitsiana fototarazo antsoina hoe CRISPR/Cpf1 ny CRISPR/Cas12. Avy amin'ny rafitra CRISPR/Cas izy io, izay iantsoana ny proteinina 12 mifandray amin'ny CRISPR (Bharathkumar et al., 2022), izay mitovy tanteraka amin'ny Cas9. Ny hany mahasamihafa azy dia ny fisian'ny proteinina Cas12 ao anatiny. Raha ampitahaina amin'ny Cas9, ny Cas12 dia manana asa miavaka toy ny famoronana tendrony miraikitra mandritra ny fizotran'ny fanitsiana fototarazo, raha ny Cas9 kosa dia mamorona tendrony tsy miandany (Wang et al., 2021). Io toetran'ny Cas12 io dia mandray anjara amin'ny teknolojia fanodinkodinana ADN manokana. Amin'ny maha-proteinina afaka mamantatra sy manapaka tsara ny ADN kendrena azy, dia manana fahaiza-manao miavaka izy io, ka mahatonga azy io ho fitaovana mahomby amin'ny fampiharana isan-karazany, anisan'izany ny fanitsiana fototarazo (Pickar-Oliver sy Gersbach, 2019).
Mitovy amin'ny karazana CRISPR hafa, ny CRISPR/Cas12 dia afaka mamono na mampandeha ireo fototarazo ao amin'ny TNBC, mikendry ireo fototarazo izay mitana anjara toerana lehibe amin'ny pathogenesis na ny valin'ny fitsaboana (Yang sy Zhang, 2023). Mba hanatanterahana io dingana io, dia novolavolaina ny RNA mpitari-dalana (gRNA) izay mitarika ny Cas12 mankany amin'ny fototarazo kendrena. Raha vao mifamatotra amin'ny kendreny ny Cas12, dia mampiditra fahatapahana kofehy roa sosona ao amin'ny ADN izy ary mampandeha ny mekanisma fanamboarana ADN. Mandritra ny dingana fanamboarana, dia mety hampidirina ireo nukleotida tsy mety, izay mitarika amin'ny fiovan'ny fototarazo sy ny fahaverezan'ny fiasa (Zhang et al., 2021a). Ho fanampin'izany, dia nampiasaina ihany koa ny dikan-teny nohatsaraina amin'ny anzima Cas12 (antsoina hoe dCas12) mba hampandeha ireo fototarazo. Amin'ny fampifangaroana azy amin'ny activator transcription, dia azo atao ny mampirisika ny fototarazo sasany, ka mampandeha azy ireo. Ity teknolojia ity dia manana fahafahana lehibe amin'ny fampiroboroboana ny fampandehanana ireo fototarazo mpamono fivontosana (Sultan et al., 2022).
Teknolojia fanitsiana genome vao novolavolaina sy tena tsara ny "prime editing". Afaka manova ny ADN-n'ny zavamananaina amin'ny fomba tena marina izy io (Chen sy Liu, 2023). Ny "prime editing" dia tanterahina amin'ny alàlan'ny fampidirana singa roa lehibe: ny anzima CRISPR/Cas9 novaina sy ny "reverse transcriptase". Ny anjara asan'ny anzima CRISPR/Cas9 dia ny mikendry toerana voafaritra tsara ao amin'ny genome, raha ny "reverse transcriptase" kosa dia manampy amin'ny fanovana tanteraka ny ADN amin'ny toerana kendrena (Hassan et al., 2021). Ao amin'ny mekanisma fanitsiana primer, ny dingana voalohany dia ny famoronana RNA (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021). Mirakitra ny filaharan'ny kendrena sy ny môdely RNA mifanaraka amin'ny toerana fanovana irina ao amin'ny ADN kendrena izy io. Avy eo dia ampidirina ao amin'ny sela kendrena miaraka amin'ny "primer editing nuclease" (PE2) ny pegRNA. Ny PE2 dia proteinina fusion misy anzima Cas9, "reverse transcriptase", ary "primer editing adapter" (Martín-Alonso et al., 2021). Ao anatin'ny sela, ny pegRNA sy ny complexe PE2 dia mikaroka ny ADN manokana tiany hovaina. Ny anzima Cas9 dia manapaka ny ADN ary mamorona môdely misy kofehy tokana (Choi et al., 2022). Ny reverse transcriptase dia mampiasa ity môdely ity mba hanomanana ny ADN ho an'ny fanitsiana. Miaraka amin'ny fandikana ny ADN, dia tafiditra ao koa ny toromarika momba ny fanitsiana ny môdely RNA. Farany, ny kofehy ADN vao noforonina dia ampiasaina ho môdely hanamboarana ny fahatapahan'ny ADN, ka miteraka filaharan'ny ADN niova misy ny fanovana irina (Ochoa-Sanchez et al., 2021). Ny fomba fanitsiana primer dia mety hitarika fiovan'ny fototarazo miely patrana. Afaka mikendry ny fiovan'ny teboka, ny fampidirana, ny famafana, ary na dia ny fanoloana fototarazo aza (Anzalone et al., 2019; Chen sy Liu, 2023). Ny fanitsiana primer dia manolotra tombony maro raha oharina amin'ny teknolojia fanitsiana genome teo aloha. Anisan'izany ny fitomboan'ny fahamarinan'ny sela, ny fihenan'ny vokatra tsy mifanaraka amin'ny kendrena, ary ny fahafahana manova ny ADN tsy miankina amin'ny fahatapahan'ny ADN roa sosona (Anzalone et al., 2020).
Ny teknolojia CRISPR/Cas9 dia novolavolaina voalohany mba hiarovana ny bakteria amin'ny famindrana plasmid sy ny aretina phage ary taty aoriana dia nampiasaina indray ho fitaovana mahomby amin'ny fanindriana ADN mifototra amin'ny RNA ho an'ny fanitsiana genome (Jiang sy Doudna, 2017). Ankoatra izany, ny rafitra CRISPR/Cas9 dia voalaza fa hita ao amin'ny 50% sy 87% amin'ny genome bakteria sy archaeal (Ishino et al., 2018). Ny CRISPR/Cas9 dia fitaovana mety amin'ny famafana, fampidirana ary fanitsiana ny filaharan'ny fototarazo tsy ara-dalàna amin'ny fampiasana fomba in vivo sy in vitro (Sabit et al., 2021). Ankoatra izany, ny CRISPR/Cas9 dia naseho ho anisan'ny rafitra fiarovana amin'ny alàlan'ny adaptive noho ny maha-manokana azy ho an'ny fototarazo kendrena (Chen sy Zhang, 2018).
Ny CRISPR/Cas9 dia ahitana Cas9 sy ARN mpitari-dalana tokana (sgRNA). Ny Cas9 dia endonuclease ahitana singa proteinina maromaro. Ankoatra izany, ny Cas9 dia manana toetra miavaka amin'ny firafiny sy ny endriny (Pacesa et al., 2022) satria misy lobes roa: ny recognition (REC) sy ny nuclease (NUC). Ny lobe REC dia mizara ho faritra telo fanampiny: REC1, REC2, ary bridge helices (Cromwell et al., 2018). Ny NUC dia misy lobes telo, dia ny RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH ary ny sehatra fifandraisana protospacer adjacent motif (PAM) (Sary 1) (Song et al., 2016). Ny sgRNA dia misy singa roa, anisan'izany ny CRISPR RNA (crRNA) sy ny transcoding small RNA (tracer RNA) (Sary 1). Mampifandray ny proteinina Cas9 amin'ny connexins ny sgRNA mba hamorona complexe mavitrika, fantatra ihany koa amin'ny hoe complexe effector (Richter et al., 2012). Ny crRNA dia fototra mpivady nucleotide 18–20 izay mitana anjara toerana lehibe amin'ny famantarana ny filaharan'ny ADN kendrena. Ankoatra izany, ny crRNA dia miara-miasa amin'ny ADN kendrena, ary ny tracrRNA dia miasa ho toy ny scaffold ho an'ny Cas9 nuclease mba hampifamatotra ny ADN kendrena (Manghwar et al., 2019). Etsy ankilany, ny filaharan'ny PAM dia manana nucleotide 3, izay manamafy, mamaritra ary mpanelanelana ny fifamatoran'ny complexe effector amin'ny ADN. Ny subunits complex protein Cas9 RuvC sy HNH dia manana hetsika catalytic (Richter et al., 2012; Asmamaw sy Zawdie, 2021). Ny domaine HNH nuclease an'ny subunit Cas9 dia manapaka ny kofehy ADN mifandray amin'ny crRNA. Manapaka ireo kofehy ADN hafa ny sehatra RuvC nuclease ary mamorona fahatapahan'ny kofehy roa sosona (DSB), izay aorian'izay dia miasa ny mekanisma fanamboarana fahatapahan'ny ADN roa samy hafa (Jiang sy Doudna, 2017) (Sary 1).
Sary 1. Topimaso momba ny CRISPR/Cas9 (A). Singa ao amin'ny rafitra CRISPR/Cas9: (i). Ny endonuclease Cas9 dia tompon'andraikitra amin'ny fanapahana ny filaharan'ny ADN kendrena, (ii) RNA mpitari-dalana tokana (sg) vokatry ny fampifangaroana ny chimera crRNA sy tra-crRNA. (roa). Ny Cas9 dia misy singa maromaro toy ny Rec I, Rec II, lobe NUC (singa madinika ny HNH sy Ruv C) ary sehatra fifandraisana PAM (C) miaraka amin'ny asa mifandraika amin'izany. Ny complexe proteinina CRISPR/Cas9 dia manapaka ny filaharan'ny ADN ho endrika tsy mifameno sy mifameno (D). Ny CRISPR/Cas9 dia manova ny genome amin'ny dingana telo: ny fanekena, ny fanapahana ary ny fanamboarana. Ny sg-RNA namboarina dia mitarika ny Cas9 ary mamantatra ny filaharana irina amin'ny alàlan'ny singa mifameno crRNA. Ny Cas9 dia mamantatra ny filaharan'ny PAM amin'ny 5′-NGG-3′ ary mandrendrika ny ADN, mamorona ADN-RNA mifangaro ary mampihetsika ny fisarahana. Ny sehatra HNH an'ny Cas9 dia manapaka ny kofehy mifameno, ary ny sehatra RuvC kosa manapaka ny kofehy tsy mifameno. Ny CRISPR/Cas9 dia manamboatra ny ADN ds amin'ny alàlan'ny fanapahana azy amin'ny fomba roa: ny fifandraisana farany tsy homologous (NHEJ) sy ny fanamboarana homology-directed (HDR). Ny NHEJ dia manamboatra ny ADN roa sosona raha tsy misy ADN homologous vahiny amin'ny alàlan'ny dingana anzima, izay mekanisma mora misy fahadisoana izay afaka mampiditra na manala ny filaharan'ny ADN kisendrasendra. Ny HDR dia tena manokana ary mitaky môdely ADN homologous.
Ny lalan'ny fanamboarana ampiasain'ny CRISPR/Cas9 dia ahitana ny mekanisma tsy homologous end joining (NHEJ) sy ny homology-directed repair (HDR). Ny NHEJ dia lalan'ny fahadisoana mora isehoana satria misy fampidirana na famafana ary tsy mitaky lamina mandritra ny mekanisma fanamboarana. Mampiasa nucleotides kisendrasendra izy io mba hamoronana proteinina mahazatra (Abbasi et al., 2021). Ity rafitra fanamboarana ity dia misy complexes efatra toy ny complexe KU, ny complexe protein cross-complementing type 4 (XRCC-4), ny anzima fanodinana ADN end, ary ny protein kinase ADN-PKcs (Abbasi et al., 2021). Ny proteinina KU complex dia manana subunits roa, Ku 70 sy Ku 80, ary mitana anjara toerana lehibe amin'ny mekanisma NHEJ, satria ny mekanisma fanamboarana dia atomboka amin'ny fifamatoran'ny subunits roa (Ku 70 sy Ku 80) amin'ny tendrony dombo na saika dombo amin'ny ADN kendrena (Abbasi et al., 2021), izay miasa ho toy ny scaffold mba handraisana ireo singa hafa mifandraika amin'ny NHEJ amin'ny toerana misy ny ratra (Yang et al., 2020). Ny XRCC-4 sy ny DNA ligase dia ahitana asidra amine 334 sy 911, tsirairay avy, ary ny XRCC4-DNA ligase IV complex dia mandrisika ny fametahana ny tendron'ny ADN (Chatterjee et al., 2015). Ny anzima fanodinana ny tendron'ny ADN, fantatra ihany koa amin'ny hoe polynucleotide kinase 3′-phosphate, dia anzima fanodinana ny tendron'ny ADN. Afaka manala ny vondrona 3′P ao amin'ny ADN izy ary mampifanaraka ny vondrona 5′OH mandritra ny fanamboarana DSB. Tafiditra ao anatin'izany koa ny fanamboarana ireo tapaka kofehy tokana (SSB) amin'ny fampiasana ny lalan'ny fanamboarana SSB (Chatterjee et al., 2015). Ny ADN-PKcs an'ny proteinina kinase dia proteinina kinase miankina amin'ny ADN izay ahitana singa catalytic an'ny PIKK (kinase mifandraika amin'ny phosphatidylinositol 3-kinase) sy ny fianakaviana ataxia telangiectasia mutated (ATM), ary koa ny ATR mifandraika amin'ny ATM sy Rad3. tapaka kofehy (DSB) sy tapaka kofehy tokana (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
Mekanisma fanamboarana marina kokoa sy mety kokoa ny HDR satria ny fampahalalana dia adika amin'ny fampiasana ny endrika tsy simba amin'ny ADN duplex homologous, na dia mitaky ny fisian'ny chromatids rahavavy aza. Mitranga izany mandritra ny dingana S/G2 amin'ny tsingerin'ny sela mampinono. Ny HDR dia mitranga indrindra amin'ny karazana leviora, saingy tena ilaina amin'ny biby mampinono ny NHEJ (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021). Aseho amin'ny Sary 1 ny mekanisma fanamboarana feno.
Koa satria ny TNBC dia vokatry ny tsy fetezan'ny fototarazo sy epigenetika, ny fanitsiana ny tsy fetezan'ny fototarazo/epigenomika maligna amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fomba fitsaboana mety (Chen et al., 2019). Ho fanampin'izany, ny sasany amin'ireo singa fandikana tafiditra amin'ny fandrindrana ny fandikana manokana ny sela dia mety mampiseho toetra miavaka amin'ny sela homamiadana, izay manondro fa ny fandrindrana ny fandikana dia mety ho fomba tsara indrindra amin'ny fitsaboana homamiadana (Drost et al., 2017). Ny fampiasana ireo toetra molekiolan'ny fivontosana ireo, toy ny lesoka fototarazo, epigenetika ary fandikana, ho an'ny fampivoarana fanafody dia afaka manatsara ny vokatra ara-pitsaboana sy mampihena ny vidin'ny fitiliana. Ny CRISPR dia fitaovana fanitsiana fototarazo mety hitranga izay tsy vitan'ny hoe afaka mamantatra sy mamantatra ireo lasibatra fototarazo miteraka homamiadana, fa azo ampiasaina ihany koa hanitsiana, hanafoanana ary hanovana epigenetika ny oncogenes ao amin'ny sela olombelona (Tabilao 1) (Ahmed et al., 2021). Maro ireo fitiliana CRISPR no natao mba hitadiavana fototarazo mifandraika amin'ny mpanafoana ny fivontosana, ny oncogenes ary ny fanoherana ny fanafody. Aseho amin'ny Sary 2 ny fampiasana ny CRISPR/Cas9 hanovana ireo oncogene TNBC isan-karazany.
Sary 2. Fanovana ny fototarazon'ny oncogenes TNBC isan-karazany amin'ny fampiasana CRISPR/Cas9 ka miteraka fihenan'ny fitomboan'ny fivontosana sy ny metastasis. Ireo oncogenes ireo dia ahitana ny CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 sy CXCR7, Crypto1, ROR1 ary ST8SIA, izay tafiditra amin'ny fisian'ny sy ny metastasis an'ny TNBC.
Ny fifindran'ny sela homamiadana, ny fanafihana, ary ny fifindran'ny epithelial-mesenchymal (EMT) dia mifandray amin'ny ITGA9. Ny fanadihadiana teo aloha dia naneho fa ny ITGA9 dia mpilalao fototra amin'ny lalan'ny Notch ary mitana anjara toerana mahaliana amin'ny metastasis rhabdomyosarcoma (Molist et al., 2020). Ho fanampin'izany, ny ITGA9 dia hita fa mifandray akaiky amin'ny vinavinan'ny marary amin'ny karazana fivontosana maromaro, anisan'izany ny homamiadan'ny nono (Wang Z. et al., 2019). Ho fanampin'izany, ny fanadihadiana bioinformatika momba ny ITGA9 dia naneho fa ny fanehoany ao amin'ny TNBC dia avo kokoa noho ny amin'ny karazana homamiadan'ny nono hafa. Ny haavon'ny ITGA9 avo dia mifandray amin'ny metastasis sy ny fiverenan'ny fivontosana amin'ny marary TNBC. Ny fanesorana ny ITGA9 tamin'ny CRISPR/Cas9 dia niafara tamin'ny toetra mitovy amin'ny sela fototry ny homamiadana (CSC), ny angiogenesis fivontosana, ny fitomboan'ny fivontosana, ary ny fihenan'ny metastasis amin'ny alàlan'ny fampiroboroboana ny fahasimban'ny β-catenin ao amin'ny TNBC (Wang Z. et al., 2019).
Anisan'ny fianakaviana TGF-β ny Crypto-1 ary tena ilaina amin'ny embryogenesis aloha, ny fikojakojana ny sela fototra, ary ny metastasis homamiadana (Ishii et al., 2021). Fantatra ihany koa amin'ny hoe Tdgf-1, proteinina famantarana GPI-anchored oncogenic izy io izay tafiditra amin'ny fanaraha-maso ny fiforonan'ny primitive streak, mesoderm ary endoderm, ary koa ny fananganana asymmetry havia/havanana amin'ny fivoaran'ny taova mandritra ny embryogenesis (Zhang et al., 2021b). Fanampin'izany, ny Cripto-1 dia hita fa tafiditra amin'ny tetezamita epithelial-mesenchymal (EMT) ho toy ny mari-pamantarana sela fototra (Zhang et al., 2021b). Ny EMT dia tena ilaina tsy ho an'ny dingana isan-karazany toy ny fivoaran'ny embryonic, fibrosis ary fanasitranana ratra ihany, fa koa ho an'ny fanafihana homamiadana sy metastasis. Fanampin'izany, ny Cripto-1 dia hita fa mifandray amin'ny receptors Notch efatra ary manatsara ny fahamatorana aorian'ny fandikana (Brandstadter sy Maillard, 2019). Fantatra fa tafiditra amin'ny fitazonana ny sela homamiadan'ny nono ny lalan'ny famantarana Notch. Nasehon'ny fanadihadiana fa ny fanesorana ny Crypto-1 amin'ny alalan'ny CRISPR/Cas9 dia manakana ny fitomboan'ny homamiadana sy ny metastasis. Noho izany, ny Crypto-1 dia mety ho lasa lasibatra fitsaboana manan-danja ho an'ny TNBC (Castro et al., 2015).
Ny proteinina XCL12 sy ny mpandray chemokine CXC (CXCR4 sy CXCR7) dia mitana anjara toerana isan-karazany amin'ny fihanaky ny sela homamiadana, ny fitomboana, ny fifindra-monina ary ny fanafihana (Wu et al., 2015). Ireo chemoreceptor ireo dia mifandray amin'ny fivoaran'ny TNBC amin'ny alàlan'ny lalan'ny famantarana maro amin'ny modely in vivo sy in vitro (Wu et al., 2015). Ho fanampin'izany, ny fampandehanana ny CXCR4 sy CXCR7 dia mifandray amin'ny faharefoana bebe kokoa amin'ny metastasis sy ny vinavina ratsy amin'ny TNBC (Karn et al., 2022). Noho izany, ny fanesorana ny CXCR4 sy CXCR7 dia mety ho lasa fototarazo kendrena fanafody mahomby amin'ny fitsaboana ny homamiadan'ny nono, anisan'izany ny TNBC. Ny fanadihadiana nataon'i Yang et al. Yang et al (2019) dia nampiasa CRISPR/Cas9 mba handravana ny fototarazo CXCR4 sy CXCR7 ary nahita fa ny fihanaky ny TNBC, ny fitomboana, ny fifindra-monina ary ny fanafihana dia voasakana be (Yang et al., 2019).
Nitombo ny tahan'ny miR-3662, oncogene TNBC, tao amin'ny sela homamiadan'ny nono (Yi et al., 2022). Ny fihenan'ny miR-3662 dia hita fa manakana ny fitomboan'ny fivontosana sy ny metastasis amin'ny homamiadan'ny nono na in vivo na in vitro (Agarwal sy Gupta, 2021). Ny HBP-1 dia mpanakana mahery vaika ny famantarana Wnt/-catenin ary mety ho tompon'andraikitra amin'ny fitomboan'ny sela TNBC vokatry ny miR-3662. Vao haingana, Yi et al. dia nahita fa ny axe miR-3662-HBP1 dia mandrindra ny lalan'ny famantarana Wnt/-catenin ao amin'ny sela TNBC (Yi et al., 2022). Noho ny fanehoany manokana amin'ny fivontosana, ny miR-3662 dia mety ho lasibatra fitsaboana mety ho an'ny TNBC. Noho izany, ny fihenan'ny miR-3662 vokatry ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fomba tsara indrindra amin'ny famolavolana fanafody vaovao ho an'ny fitsaboana ny TNBC.
Ny UBR5 dia nucleophosphoprotein 300 kDa izay voafaritra ho mpandrindra fototra ny tumorigenesis, metastasis, ary valin-kafatra amin'ny hery fiarovana amin'ny homamiadana isan-karazany (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). Voalaza fa mitombo be ny UBR5 ao amin'ny santionany TNBC ary mandrisika ny fiasan'ny ERα amin'ny alàlan'ny fanentanana ny fihanaky ny aretina amin'ny alàlan'ny asan'ny ubiquitin ligase (Bolt et al., 2015). Ny fanadihadiana momba ny fandaharana exome manontolo amin'ny santionany TNBC voalohany dia naneho fitomboan'ny fanehoana ny UBR5, izay manondro ny anjara asany amin'ny fivoaran'ny TNBC. Fanampin'izany, ny famafana ny UBR5 tarihin'ny CRISPR/Cas9 dia naneho fanakanana manan-danja ny metastasis TNBC sy ny fitomboan'ny modely totozy fanandramana. Ankoatra izany, ny fampidirana ny UBR5 ao amin'ny modely totozy karazana voajanahary dia namerina ny fiasany feno, raha toa kosa ka tsy hita izany fiantraikany izany tamin'ny karazana mutant tsy miasa (Liao et al., 2017). Ny tsy fahampian'ny UBR5 dia mifandray amin'ny fitomboan'ny apoptosis, ny nekrose, ary ny fanakanana ny fitomboan'ny fivontosana ao amin'ny TNBC noho ny angiogenesis tsy mahomby. Noho ny fahaverezan'ny UBR5, mihena ny fiparitahan'ny fivontosana any amin'ny taova lavitra, ary ny UBR5 dia miteraka EMT tsy ara-dalàna indrindra amin'ny alàlan'ny fampihenana ny fanehoana E-cadherin (Zhang sy Weinberg, 2018). Vao haingana, ny UBR5 dia naseho ho anton-javatra tena manan-danja amin'ny fandikana PDL1 vokatry ny IFN-γ ao amin'ny TNBC noho ny tsy fahampian'ny hetsika ubiquitination E3. Ny fanadihadiana ny transcriptome RNA dia naneho fa ny UBR5 dia mety hisy fiantraikany ara-dalàna amin'ny fototarazo mifandraika amin'ny lalan'ny IFN-γ ary mampiroborobo ny transactivation PDL1 amin'ny alàlan'ny fampitomboana ny haavon'ny fampandehanana ny proteinina kinase RNA (PKR) sy ny mpanova sy mpikatroka famantarana azy, transcription 1 (STAT1) ary ny interferon regulatory factor 1 (IRF1). Na izany aza, ny fanesorana ny fanehoana UBR5 sy PD-L1 amin'ny alalan'ny CRISPR/Cas9 dia manana fiantraikany fitsaboana miara-miasa kokoa noho ny fanakanana irery, miaraka amin'ny fiantraikany lalina eo amin'ny tontolo manodidina ny fivontosana (Wu et al., 2022). Noho izany, ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fitaovana manan-danja hanakanana ny fiasan'ny UBR5, ka hampihena ny metastasis TNBC sy ny fitomboan'ny fivontosana.
Ny ROR1 dia proteinina transmembrane karazana I izay miseho mandritra ny fivoaran'ny homamiadana sy ny embryon ary voafaritra ho proteinina oncofetal (Nicholas Borcherding, 2014). Ny fihetsika manafika ataon'ny homamiadan'ny olombelona isan-karazany dia mifandray amin'ny fitomboan'ny ROR1. Nahazo valiny mampanantena avy amin'ny fanadihadiana in vivo sy in vitro izay nahitana akora fitsaboana mikendry ny ROR1 (Chien et al., 2016). Ny haavon'ny ROR1 mRNA avo lenta amin'ny biopsies amin'ny sela nono dia mifandray amin'ny fivontosana mahery vaika toy ny basal-like breast (BL) sy ny fifindrany any amin'ny faritra hafa amin'ny vatana. Ankoatra izany, ny fitomboan'ny ROR1 dia voafaritra ho mari-pamantarana mialoha ny fivoaran'ny TNBC (Chien et al., 2016). Na izany aza, ny fampanginana ny ROR1 amin'ny fampiasana CRISPR/Cas9 mba hampihenana ny fitomboan'ny TNBC sy ny metastasis dia ho paikady mahomby.
Ny dingan'ny sialylation dia ahitana ny fanampiana asidra sialika amin'ny glycoconjugates, izay fehezin'ny sialyltransferases (STs). Ny ST8SIA1 dia an'ny fianakaviana ST ary mitana anjara toerana lehibe amin'ny pathogenesis amin'ny aretina isan-karazany toy ny leukemia lymphocytic sy ny homamiadan'ny colorectal (Chang et al., 2018). Ny fanadihadiana ny filaharan'ny RNA dia mampiseho fa ny ST8SIA1 dia miseho betsaka ao amin'ny sela nono amin'ny marary TNBC ary mifandray tsara amin'ny fiovan'ny fototarazo suppressor tumor p53, izay mety handray anjara amin'ny pathogenesis amin'ny TNBC (Battula et al., 2017). Ho fanampin'izany, ny ST8SIA1 dia tafiditra amin'ny metastasis sy ny fiverenan'ny TNBC, izay manondro fa mitana anjara toerana lehibe amin'ny fisian'ny sy ny fivoaran'ny TNBC. Ao amin'ny modely in vitro an'ny TNBC, ny fampihenana ny ST8SIA1 amin'ny alàlan'ny CRIPSR/Cas9 dia naseho fa manakana ny fitomboana sy ny metastasis (Battula et al., 2017). Izany dia manondro fa ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fitaovana manan-danja amin'ny fanakanana ny fiasan'ny oncogene ST8SIA1 amin'ny fitsaboana ny TNBC.
Ny NAT1 dia anzima metabolika izay mandrisika ny fiforonan'ny singa xenobiotika dingana II ary hita saika amin'ny sela rehetra ao amin'ny olombelona. Ny NAT1 dia afaka mampiasa ny cofactor folate mba hikendrena ny acetyl-CoA (acetyl-CoA) na dia tsy misy aza ny substrate amine aromatika (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). Ny fanadihadiana dia naneho fa ny NAT1 dia mifehy ny fiasan'ny matrix metalloproteinase 9 (MMP9) ao amin'ny modely sela homamiadan'ny nono ary miaro amin'ny reactive oxygen species (ROS) mandritra ny mosary gliokaozy (Wang et al., 2018). Ny famafana ny NAT1 dia naseho fa manakana ny pyruvate dehydrogenase complex, izay mitarika amin'ny tsy fahatomombanan'ny mitochondria (Wang L. et al., 2019). Fanampin'izany, tatitra maro hafa no naneho fa ny fanakanana ny NAT1 amin'ny fampiasana molekiola kely sy ny fampanginana ny siRNA dia afaka mampihena ny fanafihana sy ny fihanaky ny sela homamiadan'ny nono (Stepp et al., 2018). Vao haingana, ny CRISPR/Cas9 dia nampiasaina mba hampihenana ny NAT1 ao amin'ny sela homamiadan'ny nono MDA-MB-231, izay misy fiantraikany amin'ny metabolisman'ny sela arakaraka ny haavon'ny fanehoany. Nasehon'ity fanadihadiana ity ihany koa fa ny NAT-1 dia tena ilaina amin'ny fivoarana sy ny metastasis an'ny TNBC (Carlisle et al., 2020).
Ny fandikana mirindra ny oncogenes dia fehezin'ny superenchars, transcription factors ary cofactors (Hnisz et al., 2015). Ankoatra izany, vondrona kinases miankina amin'ny cyclin (CDKs), toy ny CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, ary CDK13, no ilaina amin'ny fandrindrana ny fandikana. Anisan'izany ny CDK7 izay tafiditra amin'ny phosphorylation an'ny RNA polymerase II, izay tena zava-dehibe amin'ny fanombohana sy fanitarana ny fandikana oncogene amin'ny pathogenesis an'ny TNBC. Tao anatin'ny fanadihadiana iray manan-danja, ny famafana ny CDK7 nataon'ny CRISPR/Cas9 dia nanakana ny TNBC, izay manondro fa ny pathogenesis an'ny TNBC dia miankina amin'ny CDK7 (Wang Y. et al., 2015).
Nasehon'ny fanadihadiana fa ny fiovan'ny fototarazo ao amin'ny MYC sy RBP (proteinina mampifamatotra RNA) dia mety hitarika apoptosis, raha toa kosa ny fiovan'ny fototarazo tokana ao amin'ny MYC na RBP dia tsy misy fiantraikany amin'ny fitomboan'ny sela homamiadana (Einstein et al., 2021). Maherin'ny 1000 ny RBP ao amin'ny genome olombelona no nojerena tamin'ny fampiasana tranomboky mifototra amin'ny CRISPR/Cas9. Amin'ireo, RBP 57 no hita fa tena ilaina amin'ny fitomboan'ny sela homamiadana miaraka amin'ny haavon'ny MYC avo lenta (Wheeler et al., 2020). Ankoatra izany, ny YTHDF2 dia zava-dehibe amin'ny fitazonana ny fitomboan'ny sela TNBC ary mampihena ny habetsaky ny transcripts methylated mandritra ny transcription sy ny fandikan-teny avo lenta ao amin'ny sela homamiadana miaraka amin'ny fanehoana MYC ambony kokoa. Fanampin'izany, ny YTHDF2 dia tsy ilaina amin'ny sela homamiadana, izay tsy dia miankina amin'ny haavon'ny MYC avo lenta mba hanalavana ny fahaveloman'ny marary TNBC (Einstein et al., 2021), izay manondro fa mety ho lasibatra fitsaboana mety ho an'ny fanafody afaka mandresy ny TNBC izany.
Eo amin'ny 1% eo ho eo amin'ny totalin'ny genome-n'olombelona ny proteinina zinc finger (ZNF). Nasehon'ny fanadihadiana fa afaka mandrindra ny fihanaky ny sela amin'ny homamiadana isan-karazany ny ZNF, toy ny homamiadan'ny aty, ny homamiadan'ny nono ary ny homamiadan'ny tsinaibe (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). Nampiasaina handinihana ireo gène suppressor tumor (TSG) isan-karazany ao amin'ny sela homamiadan'ny nono ireo tranomboky novokarin'ny CRISPR knockout (Shalem et al., 2014). Nanomboka teo, ny fanadihadiana transcriptomic momba ny sela homamiadan'ny nono voafafa CRISPR/Cas9 ZNF319 dia naneho fa ny ZNF319 dia gène suppressor tumor izay mampihena ny fihanaky ny homamiadan'ny nono ary noho izany dia tafiditra amin'ny mekanisma famantarana isan-karazany sy ny asa biolojika hafa (Wang L. et al., 2022).
Ny Ferroptosis dia karazana fahafatesan'ny sela voarindra izay miankina amin'ny fisian'ny vy. Fantatra fa ny fivoaran'ny ferroptosis dia voataonan'ny fisian'ny peroxide lipida. Ankoatra izany, voalaza fa mampiseho peroxidation lipida aloha ny PKCβII, ary ny fitomboan'ny peroxidation lipida dia mifandray amin'ny ferroptosis. Ny fandinihana ny tranomboky misy ny inhibitors kinase CRISPR/Cas9 dia naneho fa ny PKCβII dia tafiditra amin'ny dingan'ny peroxidation lipida, izay tena ilaina amin'ny ferroptosis ao amin'ny sela MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022). Noho izany, izany dia manondro fa ny fanesorana ny PKCβII amin'ny CRISPR/Cas9 dia mety ho lasibatra mety ho an'ny fitsaboana ny aretina mifandraika amin'ny ferroptosis (Zhang et al., 2022).
Inoana fa ny fanoherana ny fanafody no tompon'andraikitra amin'ny 90% eo ho eo amin'ny fahafatesana amin'ny mararin'ny homamiadana ary iray amin'ireo fanamby lehibe amin'ny fitsaboana homamiadana (Bukowski et al., 2020). Ny valiny dia manondro fa ampy ny isan'ny fototarazo mifandraika amin'ny fivoahan'ny fanafody, ny fanamboarana ADN, ny apoptosis ary ny lalan'ny famantarana sela isan-karazany no mifandray amin'ny fanoherana ny fanafody (Haider et al., 2020). Anisan'izany, fototarazo maromaro no nokendrena tamin'ny fitaovana CRISPR/Cas9 ary naneho vokatra mampanantena amin'ny fampihenana ny fanoherana ny fanafody sy ny fampitomboana ny fahombiazan'ny fitsaboana homamiadana (Vaghari-Tabari et al., 2022). Ankoatra izany, ny tranomboky fitiliana ny fototarazo CRISPR/Cas9 avo lenta dia voarohirohy amin'ny fanovana ny asan'ny fototarazo mety ho kendrena amin'ny fanoherana ny fanafody (Shalem et al., 2015). Mba hamantarana ireo fototarazo mahatohitra ny paclitaxel, dia nampiasaina ny fandaharana RNA miaraka amin'ny fitiliana tranomboky sgRNA manerana ny genome mba hamantarana ireo fototarazo valo, anisan'izany ny histone deacetylase 9 (HDAC9), izay mifandray amin'ny fanoherana ny fanafody amin'ny marary voan'ny TNBC miverimberina (B et al., 2020). Tao amin'ny fanadihadiana iray hafa, dia hita fa nitombo ny fanehoana ny diserine/threonine sy tyrosine protein kinase (DSTYK) nandritra ny fahaveloman'ny marary TNBC izay notsaboina tamin'ny fanafody miady amin'ny homamiadana. Ankoatra izany, ny fihenan'ny DSTYK vokatry ny CRISPR/Cas9 dia nanamafy be ny apoptosis an'ireo sela homamiadana mahatohitra fanafody in vitro (sela SUM102PT sy sela MDA-MB-468) ary modely TNBC in vivo (Ogbu et al., 2021).
Na dia miasa tsy ara-dalàna aza ny lalan'ny MAPK ao amin'ny TNBC, dia tsy dia misy fiantraikany ara-pitsaboana ny fitsaboana mifantoka amin'ny MEK. Ny fandinihana ny genomic library CRISPR/Cas9 dia naneho fa ny fanakanana ny PSMG2 (proteome assembly chaperone 2) dia mampitombo ny fahatsapana ny sela TNBC BT549 sy MB468 amin'ny MEK inhibitor AZD6244. Ny fihenan'ny PSMG2 amin'ny CRISPR/Cas9 dia nanova ny fiasan'ny proteasome ara-dalàna, izay nitarika ny fanesorana ny PDPK1 vokatry ny autophagy, ka nanatsara bebe kokoa ny sela fivontosana ao amin'ny modely totozy TNBC vokatry ny AZD6244 (MEK inhibitor) sy MG132 (proteasome inhibitor). Noho izany, ny proteasome sy ny MAP kinase (MEK) inhibitors dia azo ampiasaina miaraka mba hampihenana ny fihanaky ny sela fivontosana (Wang X. et al., 2022).
Nampiasaina ihany koa ny CRISPR/Cas9 mba handinihana ny fahaverezan'ny fiasan'ny fototarazo izay mitarika amin'ny fanoherana ny TNBC (Shu et al., 2020). Nohazavain'i Ge et al ny mekanisma mahatonga ny sela homamiadana tsaboina amin'ny JQ1, BET bromodomain inhibitor (BBDI), ao amin'ny TNBC. Tamin'ny fampiasana ny CRISPR/Cas9, dia hitan'izy ireo fa ny famafana ny fototarazo rb1 dia nahatonga ny TNBC ho lasa mahatohitra ny fanafody miady amin'ny homamiadana JQ1. Noho izany, zava-dehibe ny fiasan'ny rb1 amin'ny valin'ny fanafody JQ1 ao amin'ny TNBC. Nitatitra ihany koa izy ireo fa ny paclitaxel dia CDK4/6 kinase/microtubule inhibitor, ary ny fampiarahana azy amin'ny BBDI toy ny JQ1 dia mety hanome valinteny fitsaboana mampanantena amin'ny TNBC mahatohitra fanafody (Ge et al., 2020).
Voalaza fa ny tontolon'ny fandikana ny RNA tsy misy kaody lava (lncRNA) no tompon'andraikitra amin'ny fanoherana ny fitsaboana neoadjuvant ao amin'ny TNBC. Ity fanadihadiana ity dia mampiseho fa misy dika mitovy amin'ny MALAT1 lncRNA dimy samihafa no avo lenta ao amin'ny TNBC. Fanampin'izany, ny famafana ny MALAT1 vokatry ny CRISPR/Cas9 dia nampitombo ny fahatsapan'ny sela TNBC BT-549 amin'ny paclitaxel sy doxorubicin, izay manondro ny mety ho anjara asan'ny fanoherana ny MALAT1 ao amin'ny TNBC (Shaath et al., 2021).
Samy hafa ny fiovan'ny fototarazo ao amin'ny BRCA1 (BRCA1m) ka noho izany dia sarotra hita. Ny fikendrena ny PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase), ilay mpiara-miasa mahafaty amin'ny BRCA1, dia mety hampitombo ny fahatsapan'ny fanafody TNBC. Amin'ny fampiasana CRISPR/Cas9, ny famafana ny PARP1 dia nampitombo ny fahatsapan'ny fanafody miady amin'ny homamiadana toy ny doxorubicin, gemcitabine ary docetaxel amin'ny sela TNBC mBRCA1 mutant, izay manondro fa ny PARP1 koa dia tafiditra amin'ny fanoherana ny fanafody ao amin'ny TNBC (Vaghari-Tabari et al., 2022). Ny fiovan'ny fototarazo mpamono fivontosana BRCA1 na BRCA2 dia fantatra fa mampitombo ny mety hisian'ny homamiadan'ny nono amin'ny olona. Ny fitsaboana ireo marary ireo dia mitaky ny fampiasana fanafody manakana ny PARP. Fanampin'izany, voaporofo fa ny fanesorana ny nucleotide salvage factor DNPH1 amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9 dia afaka manala ny nucleotide 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate misy poizina, ka mampitombo ny fihetsiky ny sela tsy ampy BRCA amin'ny fahatsapana ny PARP inhibitors (Fugger). et al., 2021). Noho izany, ny CRISPR/Cas9 sy ny PARP1 inhibitors dia mety ho lasa paikady fitsaboana manan-danja ho an'ny TNBC.
Ny fototarazo penetrant glycoprotein (P-gp) dia fototarazo mahatohitra fanafody maro izay amin'ny ankapobeny dia mitombo ao amin'ny 41% eo ho eo amin'ny TNBC rehetra (Sun et al., 2020). Ny fivoahan'ny fanafody vokatry ny P-gp dia voafaritra ho mpandrindra fototra amin'ny fanoherana ny fanafody amin'ny homamiadan'ny nono. Ny inhibitors P-gp dia naneho fitomboan'ny fahatsapana amin'ny fanafody miady amin'ny homamiadana amin'ny homamiadan'ny nono (Famta et al., 2021). Noho izany, ny ablation na ny fampihenana ny inhibitors P-gp sy P-gp izay entin'ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fomba tena manan-danja handresena ny fanoherana ny fanafody amin'ny TNBC.
Fantatra fa miteraka fanoherana ny fanafody ao amin'ny TNBC ny mpitatitra kasety G2 (ABCG2) mifamatotra amin'ny ATP (Palasuberniam et al., 2015), na dia tsy misy tatitra amin'izao fotoana izao momba ny fifandraisana misy eo amin'ny fampanginana ny CRISPR/Cas9 sy ny ABCG2 ary ny tsy fiasan'ny gène suppressor tumor. Mety hampitombo ny fiasan'ny ABCG2 ny PTEN (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). Noho izany, ny fampiasana CRISP/Ca9 hanesorana ny ABCG2 sy ny fampifangaroana azy amin'ny inhibitor ABCG2 dia mety ho fitsaboana mety tsara handresena ny fanoherana ny fanafody ao amin'ny TNBC. Ny Tabilao 2 dia miresaka momba ny CRISPR/Cas9 mikendry ny gène resistance rehetra.
Tabilao 2. Ny CRISPR/Cas9 dia mikendry ireo fototarazo mahatohitra ny TNBC isan-karazany mba hampitomboana ny fahatsapan'ny sela ny fanafody miady amin'ny homamiadana.
Fitaovana mety tsara ho an'ny fandinihana ny fiovan'ny fototarazo mifandraika amin'ny pathogenesis homamiadana ny tranomboky CRISPR/Cas9 (Chan et al., 2022). Ity fomba fandinihana ity dia misy dingana efatra toy ny (a) fananganana tranomboky, (b) famindrana lentiviral, (c) fandinihana phenotypic, ary (d) famakafakana ny fototarazo kendrena. Na dia manana fiasan'ny lalan'ny MAPK tsy ara-dalàna aza ny TNBC, dia tena ratsy ny vinavinan'ny fitsaboana MEK kendrena ho an'ny marary TNBC mitondra fiovan'ny fototarazo manakana ny fivontosana toy ny PTEN, RB1, ary TP53.
Fanampin'izany, ny fitiliana fototarazo mampiasa CRISPR/Cas9 dia nizaha toetra ny molekiola mahery vaika sy voafantina indrindra, ny dehydrocatrol, izay betsaka amin'ny fitrandrahana voninkazo sy ravina Goatemalteka, mba hahatakarana ny fiantraikan'ny dehydrocatrol amin'ny MDA-MB-231. Fomba fiasan'ny cytotoxicity sela voafantina. Toetran'ny mesenchymal stemness amin'ny karazana TNBC. Ity fitiliana mifototra amin'ny CRISPR/Cas9 ity dia naneho ihany koa fa ny HSD17B11, fototarazo mandika ny 17β-hydroxysteroid dehydrogenase karazana 11, dia hita betsaka ao amin'ny sela MDA-MB-231 ary miteraka dehydrofalcarinol manokana ho an'ny sela MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020). Noho izany, izany dia manondro fa ny fitiliana fototarazo CRISPR/Cas9 dia manana fahafahana lehibe amin'ny famantarana ny fomba fiasa fototry ny toetra manohitra ny homamiadana amin'ny singa voajanahary mety hitranga.
Ankoatra izany, ny fahalemen'ny TNBC amin'ny homamiadana dia nodinihina tamin'ny fampiasana fitiliana CRISPR/Cas9 in vivo tsy mitanila manerana ny genome, izay naneho fifandraisana misy eo amin'ny lalan'ny oncogenic sy ny lalan'ny tumor suppressor. Voalaza fa mitana anjara toerana lehibe amin'ny fanaraha-maso ny fivontosana ao amin'ny TNBC ny singa fototra amin'ny lalan'ny mTOR sy Hippo. Fanampin'izany, ny fanadihadiana dia naneho fa ny fanakanana ara-panafody ny mTORC1/2 sy ny YAP oncoprotein dia manakana tsara ny pathogenicity an'ny TNBC amin'ny fampiasana modely synergy drug-matrix in vitro sy xenografts avy amin'ny marary in vivo. Ankoatra izany, ny fanakanana mTORC1/2-mediated Torin-1 dia mampitombo ny macropinocytosis, raha toa kosa ny fanakanana YAP vokatry ny verteporfin dia mitarika amin'ny fahafatesan'ny sela TNBC. Raha fintinina, ireo valiny ireo dia manasongadina ny hery sy ny hamafin'ny fitiliana CRISPR in vivo manerana ny genome mba hamantarana fitsaboana vaovao sy mahomby ho an'ny TNBC (Dai et al., 2021).
Ny tsy fahatomombanan'ny hery fiarovana dia anton-javatra manan-danja amin'ny fivoaran'ny tumorigenesis. Ny sela homamiadana dia misoroka ny fanadiovana ny hery fiarovana amin'ny alàlan'ny fandalovana ny rafitra fiarovana, anisan'izany ny fanelingelenana ny asan'ny sela fiarovana ao amin'ny tontolo manodidina ny tumor sy ny fanimbana ny hery fiarovana. Noho izany, ny fampivoarana hery fiarovana nohatsaraina dia mety ho fomba fiasa fototra amin'ny ady amin'ny tumors. Ny fampiasana ny fanovana ny fototarazo mifototra amin'ny CRISPR/Cas9 dia mamaha olana maromaro mifandraika amin'ny tsy fahatomombanan'ny hery fiarovana avy amin'ny fomba fijery samihafa. Ny CRISPR/Cas9 dia nampiasaina hanatsarana ny hery fiarovana amin'ny fivontosana amin'ny homamiadan'ny nono amin'ny alàlan'ireto lalana manaraka ireto (Sary 3).
Sary 3. Ny fitsaboana amin'ny alalan'ny hery fiarovana CRISPR/Cas9 dia mikendry ny sela TNBC. Ny fahaverezan'ny CDK5 sy ny fihenan'ny PDL1 sy CD155 dia manamafy ny hery fiarovana. Toy izany koa, ny fahaverezan'ny A2AR sy ny fihenan'ny TAA toy ny HER2, mucin 1 ary TEM8 dia nampitombo ny fahombiazan'ny sela CAR-T amin'ny famonoana sela homamiadana. Ny fitiliana sela T tarihin'ny CRISPR/Cas9 dia naneho fa ny fikorontanan'ny p38 kinase dia mampitombo ny asan'ny sela T manohitra ny fivontosana. Ny sela T novain'ny CRISPR/Cas9 dia mampitombo ny fanehoana ny TCR (mpandray sela T), ka miteraka asan'ny sela T manohitra ny fivontosana.
Ny tanjon'ny fitsaboana amin'ny alalan'ny hery fiarovana dia ny hamporisika ny hery fiarovana hanafika ny sela homamiadana. Ny fihoaram-pefy amin'ny proteinina "checkpoint" fiarovana dia mazàna misoroka ny fihetsika autoimmune saingy mety hanampy ny homamiadana hisoroka izany (Topalian et al., 2015). Ireo proteinina ireo dia misoroka ny fihetsika fiarovana amin'ny alàlan'ny fifamatorana amin'ny mpandray eo amin'ny velaran'ny sela fiarovana. Ny proteinina "checkpoint" maromaro (toy ny CD155 sy PD-L1) dia mikendry ny mpandray PD-1 amin'ny sela fiarovana ary miseho amin'ny homamiadan'ny nono, indrindra fa ny TNBC (Li Y.-C. et al., 2020). Ny fandringanana ny PD-L1 na ny mpandray azy amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9 dia afaka mandrisika ny hery fiarovana hanafika ny fivontosana TNBC (Yahata et al., 2019). Fanampin'izany, ny fihenan'ny fanehoana PD-L1 amin'ny alàlan'ny famafana ny CDK5 amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9 dia naseho fa manakana ny fitomboan'ny fivontosana in vitro sy in vivo (Deng et al., 2020). Ny fanakanana ny fitomboana amin'ny modely in vitro sy in vivo amin'ny homamiadan'ny nono dia manondro fa ny fampihenana ny CD155 vokatry ny shRNA dia mety hisy fiantraikany amin'ny fitsaboana ny homamiadan'ny nono (Gao et al., 2018).
Maneho CAR izay mahafantatra ireo antigène mifandraika amin'ny fivontosana (TAA) ny sela CAR T ary afaka mampiasa ny fampihenana ny proteinina checkpoint mba hampitomboana ny asany (Li C. et al., 2020). Misy karazana lasibatra mety ho an'ny fitsaboana sela CAR T amin'ny homamiadan'ny nono, anisan'izany ny TAA maromaro toy ny HER2, mucin1, ary TEM8 (Bajgain et al., 2018). Misy porofo fa ny sela CAR T mikendry ny mesothelin (be loatra ny fanehoana azy ao amin'ny sela TNBC BT-459) dia mahomby kokoa amin'ny homamiadana rehefa esorina amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9 ny PD-1 (Hu et al., 2019). Na izany aza, ny fanasarahana ireo sela T amin'ny marary ary avy eo manova azy ireo ex vivo dia dingana mandany asa sy fotoana. Na dia afaka mampihena ny fepetra takiana amin'ny fanasarahana aza ny sela T manerantany, dia tokony hesorina ny sela T mpanome izay maneho ny antigen leukocyte olombelona (HLA) kilasy I sy ny mpandray sela T (TCR) mba hisorohana ny tsy fetezan'ny graft-versus-host (Ren et al., 2017). , 2017a). Amin'ny fampiasana CRISPR/Cas9, ny HDR dia afaka manafoana miaraka ny TCR sy HLA ary mandrodana ny gène mpamoaka ny CAR. Ny fanadihadiana dia naneho fa ny CRISPR/Cas9 dia azo ampiasaina hampidirana CAR anti-CD19 ao amin'ny toerana TCR, ka mamokatra CAR mahomby nefa tsy mampihena ny sela T (Dimitri et al., 2022). Noforonina ny teknolojia Multiplex mba hamoronana sela CAR T allogeneic amin'ny alàlan'ny fanesorana miaraka ny TCR, beta-2-microglobulin (B2M), ny subunit HLA-I ary ny proteinina hafa toy ny PD-1 sy CTLA-4, izay mety manana toetra manohitra ny homamiadana bebe kokoa. manohitra ny TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
Ny fampiasana CRISPR/Cas9 dia mety hanatsara ny fahombiazan'ny sela CAR-T. Fantatra fa manana toetra mampihena ny hery fiarovana ny adenosine ary afaka mampihena ny hery fiarovana amin'ny homamiadana amin'ny alàlan'ny fanakanana ny fiasan'ny sela T sy ny fampandehanana ny mpandray adenosine A2A (A2AR) (Vigano et al., 2019). Ny fampanginana ny A2AR amin'ny fampiasana CRISPR/Cas9 dia nanatsara be ny fahombiazan'ny sela CAR-T in vivo (Giuffrida et al., 2021). Fantatra fa mampiseho toetra mampiavaka ny sela T ny sela T toy ny fanitarana ny sela, ny fiforonan'ny sela, ny adin-tsaina oksidativa ary ny adin-tsaina genomic. Ny fitiliana sela T mifototra amin'ny CRISPR/Cas9 dia naneho fikorontanan'ny kinase mpandray sela T 25 samihafa. Anisan'izany, ny famafana ny kinase p38 dia naseho fa mampitombo ny asan'ny sela T amin'ny fanoherana ny fivontosana, izay manondro fa ny kinase p38 dia mpandrindra fototra amin'ny fandrindrana ny sela CAR-T (Gurasamy et al., 2020).
Azo ovaina ara-jenetika amin'ny alalan'ny CRISPR/Cas9 ny sela T mba hamokarana TCR be dia be. Ny famindrana sela T novaina ara-jenetika amin'ny marary dia naneho hetsika fanoherana homamiadana matanjaka kokoa noho ny sela T endogenous. Noho izany, ny TCR endogenous dia mety hifaninana amin'ny TCR novaina ara-jenetika amin'ny marary, izay mety hisy fiantraikany amin'ny mety ho vitan'ny fitsaboana homamiadana. Mba handresena io olana io, ny fampiasana CRISPR/Cas9 hanesorana ny TCR-β endogenous ao amin'ny sela mpandray ary avy eo mamindra ny sela T TCR-β amin'ny marary homamiadana dia mety hampiseho valin-kafatra fiarovana homamiadana tsara kokoa tsy mila fifaninanana ara-nofo TCR endogenous (Fan et al. 2018). Noho izany, ankoatra ny sela T novaina CRISPR, ny TCR dia mora tohina amin'ny antigen'ny fivontosana in-arivo heny noho ny sela T mahazatra novaina TCR. Fanampin'izany, amin'ny leukemia isan-karazany, ny sela T novaina novokarin'ny γδ TCR+ CRISPR dia mampiseho fanehoana sela T CD4+ sy CD8+ ambony kokoa noho ny famindrana TCR mahazatra (Legut et al., 2018). Noho izany, ny sela T novaina novokarin'ny CRISPR/Cas9 dia mety ho fomba fitsaboana amin'ny alalan'ny hery fiarovana mahomby handresena ny TNBC.
Ny integrin dia molekiola mifamatotra amin'ny sela izay hita ao amin'ny transmembranes sela ary mampiroborobo ny fifamatoran'ny sela amin'ny matrix extracellular (ECM) (Hamidi sy Ivaska, 2018). Ny tsy fahatomombanan'ny integrin dia mifandray amin'ny fivoaran'ny homamiadana sy ny fifindran'ny sela amin'ny alàlan'ny fanovana ny matrix extracellular, izay mitarika amin'ny fahaveloman'ny sela homamiadana ao amin'ny fivezivezena (Hamidi sy Ivaska, 2018). Ny fihenan'ny integrin entin'ny CRISPR/Cas9 dia mampihena ny fivoaran'ny fivontosana, ny metastasis ary ny fanjanahantany ao amin'ny TNBC. Ny fihenan'ny integrin a5 (ITGA5) dia voalaza fa mampihena ny fifindran'ny sela sy ny fivoarany amin'ny homamiadana hafa toy ny homamiadan'ny havokavoka (Ju et al., 2017), izay manondro fa ny integrin a5 dia mety ho anton-javatra fototra amin'ny pathogenesis an'ny TNBC ihany koa.
Ny famoronana totozy tsy misy fototarazo (knockout) amin'ny alalan'ny fomba nentim-paharazana amin'ny alalan'ny sela fototra embryonika (ES) dia dingana mitaky asa, fotoana ary tsy mahomby. Maharitra volana sy taona maro ny mikendry ireo sela ES amin'ny alalan'ny fampiraisana homologous, ny fiompiana totozy chimeric, ary avy eo mampiaraka azy ireo amin'ny totozy heterozygous mba hamokarana taranaka homozygous. Ilaina ny fampiraisana sarotra mba hamoronana totozy misy fiovan'ny fototarazo maromaro. Na izany aza, maro ny olana nipoitra rehefa mampiasa totozy novokarina tamin'ny alalan'ny fanesorana ny sela ES amin'ny alalan'ny CRISPR/Cas9 na amin'ny alalan'ny fampidirana singa CRISPR/Cas9 ao anaty atody zezika tokana. Ohatra, ny fampidirana fiovana matetika dia mitranga amin'ny loci biallelic ary tsy manokana momba ny fototarazo. Vao haingana no notaterina fa ny sela ES mampiasa ny teknolojia CRISPR/Cas9 dia afaka mampiditra fiovan'ny biallelic amin'ny fototarazo hatramin'ny 5 miaraka (Nishizono et al., 2021). Ho an'izany tanjona izany, ny Cas9 mRNA sy ny gRNA manokana momba ny fototarazo dimy dia nafindra niaraka tao amin'ny sela ES. Manasongadina ny fampanantenana sy ny fahombiazan'ity fomba fiasa ity izany, na dia mety ho nampitaina aza ireo fiovan'ny fototarazo ireo rehefa nobeazina ireo taranaka fototra mba hamokarana totozy knockout quintuple. Mitatitra zavatra mahagaga ihany koa ny fanadihadiana: Tsy ilaina intsony ny sela ES mba hamoronana totozy novaina fototarazo. Ho solon'izany, mba hanesorana ireo vokatra fototarazo manokana, dia nampidirina tao amin'ny embryon dingana sela tokana ny Cas9 mRNA sy gRNA. Vokatr'izany, dia noforonina ireo taranaka fototra knockout izay azo ampiasaina ara-teorika handinihana ny vokatry ny famafana fototarazo amin'ny totozy (Qin et al., 2016). Noho izany, ny CRISPR/Cas9 dia mamela ny famoronana totozy transgenic hitsaboana ny TNBC amin'ny vidiny ambany kokoa noho ny injeniera fototarazo nentim-paharazana. Amin'ny fampiasana ny rafitra CRISPR/Cas, dia novolavolaina ny modely totozy knockout vaovao izay afaka mampiditra fiovana teboka amin'ny fototarazo endogenous iray na maromaro ao amin'ny TNBC. Mifototra amin'io foto-kevitra io, ny modely biby an'ny TNBC dia azo amboarina ihany koa amin'ny alàlan'ny famafana ny BRCA1 sy p53 amin'ny alàlan'ny CRISPR/Cas9, izay miteraka fahaverezan'ny fanamboarana HR, tsy fahamarinan-toerana amin'ny genomic, ary phenotype mutant (Annunziato et al., 2020).
Amin'izao fotoana izao, fomba isan-karazany toy ny mammography, magnetic resonance imaging (MRI) ary ultrasound no ampiasaina hamantarana ny TNBC. Na izany aza, misy fetrany ihany ireo fomba ireo. Ny mammography dia ampiasaina hamantarana ny sela eo an-toerana fa tsy ny metastasis, izay nifindran'ny sela homamiadana tany amin'ny taova hafa. Tsy fomba azo itokisana hamantarana ny TNBC ny Ultrasonography (Chen sy Lee-Felker, 2023). Ny MRI dia manana fahatsapana ambony kokoa noho ny ultrasound sy ny mammography, saingy voafetra ny fahamarinan'ny diagnostika (Sha sy Chen, 2022). Ny biopsy sela dia fomba iray manafika hamantarana ny sela homamiadana. Na izany aza, amin'ny tranga sasany, ny biopsy dia mety tsy hahita ny sela homamiadana raha toa ka miala amin'ny faritra voakasika ny fanjaitra. Ankoatra izany, dia lafo be izany ary mety hiteraka ratra ho an'ny marary. Karazana homamiadana tsy mitovy ny TNBC, ka mety tsy hanome fampahalalana ampy momba ny karazana homamiadana ny biopsy. Noho izany, ilaina maika ny fomba vaovao azo itokisana amin'ny diagnostika hamantarana ny TNBC. Ny CRISPR/Cas9 dia mety ho safidy tena saro-pady sy tsy dia manafika loatra amin'ny diagnostika ho an'ny homamiadan'ny nono. Noho izany, azo ampiasaina hanatsarana ny fomba PCR ho an'ny diagnostika TNBC ny paikady mifototra amin'ny CRISPR/Cas9. Voalohany, ny proteinina Cas9 sy cpf1 ao amin'ny rafitra CRISPR dia ampiasaina hanesorana ny ADN tsy manokana, ary avy eo ireo proteinina roa ireo (Cas9 sy cpf1) dia afaka mamantatra ny filaharan'ny PAM alohan'ny hifamatotra amin'ny ADN kendrena (Deepak Singh et al., 2021). Noho izany, ny PCR dia afaka mamantatra ny fiovan'ny fototarazo mifandraika amin'ny fivoaran'ny homamiadana. Fikarohana maromaro no nampiasa ity paikady mifototra amin'ny CRISPR ity mba hamantarana ny fiovan'ny fototarazo samihafa amin'ny homamiadana samihafa (Safari et al., 2019). Noho izany, ny fomba PCR mifototra amin'ny CRISPR dia mety hampihena ny fiankinan'ny diagnostika TNBC amin'ny fomba invasive toy ny immunohistochemistry mifototra amin'ny biopsy.
Naseho tao amin'ny TNBC ihany koa ny fiovana ara-genotype amin'ny fandrindrana ny mpandray hormonina (Chen sy Russo, 2009). Ny paikady PCR mifototra amin'ny CRISPR/Cas9 mampiasa microarrays ho an'ny diagnostika eo amin'ny toerana fitsaboana dia afaka manara-maso tsara ireo fiovan'ny fototarazo ireo (Hajian et al., 2019). Afaka manome fampahalalana mifandraika amin'izany ho an'ny mpamatsy fahasalamana momba ny fiovan'ny fototarazo manokana amin'ny marary TNBC ihany koa izany, izay mety hanampy amin'ny fanatsarana ny fitsaboana azy ireo. Na izany aza, ity teknika mitambatra ity dia manana fetrany. Noho izany, ilaina ny ezaka fikarohana lalina alohan'ny ahafahana mampiasa ity fomba CRISPR/Cas-PCR ity amin'ny sehatry ny fahasalamana ho an'ny diagnostika TNBC (Yang et al., 2019).
Fotoana fandefasana: 14 Oktobra 2024